1.操作人員B2生物安全柜如果使用不當，其防護作用就可能大大地受到影響。操作人員在移動雙臂進出安全柜時，需要小心維持前面開口處氣流的完整性，雙臂應該垂直地緩慢進出前面的開口。

　　手和雙臂伸入到生物安全柜中等待大約一分鐘，以便安全柜調整完畢并且讓里面的空氣"掃過"手和雙臂的表面以后，才可以開始對物品進行處理。要在開始實驗之前將所有必須的物品置于安全柜內，以盡可能減少雙臂進出前面開口的次數。

　　2.位置空氣通過前面開口進入生物安全柜的速度大約為0.45m/s。這樣速度的定向氣流是極易受到干擾的，包括人員走近生物安全柜所形成的氣流，打開窗戶，送風系統調整以及開關門等都可能造成影響。

　　因此，zui為理想的是，生物安全柜應位于人員活動，物品流動以及可能會擾亂氣流的地方。在安全柜的后方以及每一個側面要盡可能留有30cm的空間，以利用對安全柜的維護。在安全柜的上面應留有30-35cm的空間，以便準確測量空氣通過排風過濾器的速度，并便于排風過濾器的更換。

　　3.物品放置二級生物安全柜前面的進氣格柵不能被紙，儀器設備或其他物品阻擋。放入安全柜內的物品應采用70%酒精來消除表面污染。可以在消毒劑浸濕的毛巾上進行實驗，以吸收可能濺出的液滴。

　　所有物品應盡可能地放在工作臺后部靠近工作臺邊緣的位置，并使其在操作中不會阻擋候補格柵。可產生氣溶膠的設備（例如混勻器，離心機等）應靠近安全柜的后部放置。像有生物危害性的廢棄物袋，盛放廢棄吸管的盤子以及吸濾瓶等體積較大的物品，應該放在安全柜內的某一側。在工作臺面上的實驗操作應該按照從清潔區到污染區的方向進行。

　　耐高壓滅菌的生物危害性廢棄物袋以及吸管盛放盤不應放在安全柜的外面，否則在使用這些物品時雙臂就必須頻繁進出安全柜，這樣會干擾安全柜空氣屏障的完整性，從而影響對人員和物品的防護。

　　4.操作和維護大多數生物安全柜的設計允許全天24小時工作。研究人員還發現，連續工作有助于控制實驗室中灰塵和顆粒的水平。向房間中排風或通過套管接口與專門的排風管相連接的一級A1和A2型生物安全柜，在不使用時是可以關閉的。其他如二級B1和二級B2型生物安全柜，是通過硬管安裝的，就必須始終保持空氣流動以維持房間空氣的平衡。

　　在開始工作以前以及完成工作以后，應少讓安全柜工作5分鐘來完成"凈化"的過程，應即應留在將污染的空氣派出安全柜的時間。

　　B2生物安全柜的所有維修工作應該由有資質的專業人員來進行。在生物安全柜操作中出現的任何故障都應該報告，并應在再次使用之前進行維修。

　　5.紫外燈生物安全柜中不需要紫外燈。如果使用紫外燈的話，應該每周進行清潔，以除去可能影響其殺菌效果的灰塵和污垢。在安全柜重新認證時，要檢查紫外線的強度，以確保有適當的光發射量。房間中有人時一定要關閉紫外燈，以保護眼睛和皮膚，避免因不慎暴露而造成傷害。

　　6.明火在生物安全柜內所形成的幾乎沒有微生物的環境中，應避免使用明火。使用明火會對氣流產生影響，并且在處理揮發性物品和易燃物品時，也易造成危險。在對接種環進行滅菌時，可以使用微型燃燒器或電爐，而不應使用明火。

　　7.溢出實驗室中要張貼如何處理溢出物的實驗室操作規則，每一位使用實驗室的成員都要閱讀并理解這些規程。一旦在生物安全柜中發生由生物學危害的物品溢出時，應在安全柜出于工作狀態下立即進行清理。要使用有效的消毒劑，并在處理過程中盡可能減少氣溶膠的生成。所有接觸溢出物品的材料都要進行消毒/或高壓滅菌。

　　8.認證在安裝是一季每隔一定時間以后，應由有資質的專業人員按照生產商的說明對每一臺生物安全柜的運行性能以及完整性進行認證，以檢查其是否符合國家及的性能標準。安全柜防護效果的評估應該包括對安全柜的完整性，HEPA過濾器的泄漏，向下氣流的速度，正面氣流的速度，負壓/換氣次數，氣流的煙霧模式以及警報和互鎖系統進行測試。

　　還可以選擇進行漏電，光照度，紫外線強度，噪聲水平以及震動性的測試。在進行這些測試時，檢測人員要經過專門的培訓，采用專門的技術和儀器設備。強烈建議由有資質的專業人員來進行測試。

　　9.清潔和消毒由于剩余的培養基可能會使微生物生長繁殖，因此在實驗結束時，包括儀器設備在內的生物安全柜里的所有物品都應清楚表面污染，并移出安全柜。

　　在每次使用前后，要清除生物安全柜內表面的污染。工作臺面和內壁要用消毒劑進行擦拭，所用的消毒劑要能夠殺死安全柜里可能發現的任何微生物。在每天試驗結束時，應擦拭生物安全柜的工作臺面，四周以及玻璃的內外側等部位來清除表面的污染。在對目標生物體有效時，可以采用漂白劑溶液或70%酒精來消毒。在使用如漂白劑等腐蝕性消毒劑后，還必須用無菌水再次進行擦拭。

　　推薦將安全柜一直維持運行狀態。如果要關閉的話，則應在關機前運行5分鐘以凈化內部的氣體。

　　10.清除污染B2生物安全柜在移動以及更換過濾器之前，必須清除污染。常用的方法是采用甲醛蒸汽熏蒸。應該由有資質的專業人員來清除生物安全柜的污染。